D.I. Martínez Herrera*, María A. Abeledo**, A. Lara Gutiérrez*, A. Peniche Cardeña*, M.L. Robledo Salinas*, E. Pulido Camarillo*, T.J. Rosas Sastre***, R. Flores Castro****

*Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana, Veracruz, Ver. México. **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, San José de las Lajas, La Habana, Cuba. ***Facultad de Nutrición, Universidad Veracruzana, Veracruz, Ver. México. ****CENID Microbiología Animal, Instituto Nacional de Investigaciones Forestales Agrícolas y Pecuarias, México, D.F., México

  RESUMEN

Con el propósito de evaluar varios métodos para el aislamiento primario de Brucella melitensis a partir de leche procedente de rebaños caprinos infectados se seleccionaron de forma aleatoria 45 cabras bajo los siguientes criterios: 30 vacunadas previamente, con la cepa Rev-1 de Brucella melitensis; y 15 hembras nunca vacunadas. El tamaño de muestra se basó en un modelo probabilístico con población desconocida y con prevalencia conocida de 35% (n = 1 - p / p v); donde, n = tamaño de muestra, p = prevalencia y v = coeficiente de variación (0.05). Todas las cabras seleccionadas se muestrearon por tres ocasiones a intervalos de 30 días entre uno y otro muestreo. Las muestras de leche fueron tomadas en forma aséptica de cada mitad de la ubre, en tubos estériles de cierre hermético y se refrigeraron a 4°C hasta su procesamiento en el laboratorio, dentro de las siguientes 24 horas. Las muestras se centrifugaron por 20 minutos a 10,000 X g a 4°C. y para la siembra, se utilizaron los medios de cultivo de Farrell y de agar de soya tripticaseína (TSA) enriquecidos con suero fresco de bovino. De las muestras de leche centrifugadas, se sembraron por duplicado en cada medio, porciones de grasa y sedimento de acuerdo con técnicas establecidas en la NOM - 041 - ZOO - 1995. Los resultados obtenidos, se evaluaron a través del análisis de datos categóricos (c²). Una mitad de cada uno de los medios empleados, se incubó bajo presión de bióxido de carbono del 5 al 10% y la otra, en aerobiosis. Se recuperó B. melitensis biovar-1 en el 76% de 135 muestras procesadas; y la mayor cantidad de cepas de campo se aislaron a través del medio Farrell (p<0.05); de la grasa, el 57% y del sedimento, el 67%. Además, el mejor desarrollo de las bacterias (p<0.05) en este medio se observó en la incubación bajo atmósfera de aerobiosis. Se concluye que el medio de Farrell fue más eficaz que el de TSA para ese fin, tanto a partir de la grasa de la leche como del sedimento; asimismo, la incubación de las muestras en atmósfera de aerobiosis tuvo un mejor y más exitoso desarrollo de las bacterias.

INTRODUCCIÓN

La mayoría de los casos humanos de brucelosis, se encuentran en aquellos países donde B. melitensis es el agente causal de la infección en caprinos y ovinos (1-3). Así, en América Latina son Argentina, México y Perú donde se presentan el mayor número de estos lo que se debe a las condiciones en las que los caprinos son explotados, ya que la leche producida, pocas veces se pasteuriza (4). Así también, debe considerarse que en México, más del 60% de los casos, se presentan en mujeres que poco tienen que ver con la producción de caprinos, ya que se desempeñan como amas de casa o estudiantes, entre 14 y 45 años; sin embargo, los datos epidemiológicos conducen a identificar que la fuente de infección, corresponde a contaminaciones alimenticias con lácteos sin pasteurizar y elaborados con leche de cabra (4).

La Norma Oficial Mexicana (5) que rige la Campaña Nacional contra la brucelosis en los Animales y cuyo objetivo principal es el establecimiento de zonas libres, tiene como fundamento evitar la propagación de la enfermedad y su eliminación dentro del territorio mexicano; asimismo, señala que el diagnóstico definitivo de la enfermedad se realiza a través del aislamiento e identificación bacteriológica. Sin embargo, la sensibilidad del método bacteriológico depende de la viabilidad y el número de microorganismos presentes en la muestra y de la naturaleza de la misma, la cual se contamina con frecuencia con otras bacterias (6).

La utilización de muestras en forma adecuada y la disponibilidad de medios selectivos permiten realizar el diagnóstico bacteriológico con eficacia (7). Las muestras que se recomiendan para el cultivo de Brucella en cualquier especie son las secreciones vaginales tras el parto o aborto, placenta o fetos abortados (hígado, bazo, pulmón, y contenido gástrico), semen y la leche. Esta última, resulta muy recomendable ya que más del 80% de los animales enfermos excretan Brucella por la leche (8) y constituye una vía importante de transmisión al hombre (9); no obstante no existe suficiente información disponible relacionada con el diagnóstico bacteriológico en cabras a partir de este material.

Existe una amplia variedad de medios selectivos que son utilizados para este propósito, siendo los más comunes el medio de Farrell, Agar de Soya Tripticaseína (TSA) y Thayer-Martin (10).

El medio selectivo de Farell es ampliamente empleado ya que tiene un poder de selección y capacidad de asegurar el crecimiento de las bacterias, y es transparente lo que facilita observar la morfología colonial; sin embargo, debido a la concentración de bacitracina una proporción de cepas B. melitensis puede ser inhibida, por lo que algunos autores recomiendan el medio de Thayer-Martin modificado, que permite aumentar la sensibilidad del cultivo, pero con una menor selectividad y por tanto, se contamina con más facilidad que el de Farrell; además, no es transparente lo que dificulta la visualización de la morfología colonial por medio de iluminación oblicua (11). Por otra parte el medio TSA es un medio general, que permite el crecimiento de cualquier tipo de bacteria pero se contamina con mucha facilidad (12).

Este trabajo tiene como objetivo realizar una evaluación comparativa entre varios métodos de aislamiento de Brucella melitensis a partir de leche de cabras.