Mejoras en el diagnóstico y el control de los lentivirus en pequeños rumiantes

El diagnóstico de los lentivirus de pequeños rumiantes (SRLVs), el virus de Maedi Visna y el virus de la Artritis y encefalitis caprina, es difícil porque no existe un método diagnóstico estándar. De esta premisa partía la tesis doctoral titulada ‘Análisis epidemiológico de las infecciones por lentivirus de pequeños rumiantes (SRLVs) y su contribución al estudio de la patogenia por estos virus’, realizada por Nuria Barquero Beña en la Universidad Complutense de Madrid.

El primer objetivo de esta tesis era determinar si la leche podría ser un sustrato adecuado para el diagnóstico de SRLVs en lugar de la sangre. Para ello se analizaron con el test de ELISA muestras de 50 ovejas tanto de leche como de sus correspondientes muestras de sangre. La concordancia entre los resultados de ELISA en sangre y leche fue de un 90% y el valor kappa fue de un 0,79. Estos resultados apoyan que la leche es un sustituto adecuado de la sangre en el diagnóstico de SRLVs. Además, se realizó un estudio serológico en la región central de España utilizando muestras de leche de 413 animales (250 ovejas y 163 cabras) procedentes de 13 explotaciones. Todas las explotaciones fueron positivas a la infección. Entre los animales, el 60,0% de las ovejas y el 8,0% de las cabras analizadas fueron seropositivas. Este es uno de los primeros estudios que utiliza leche en lugar de sangre para estimar la seroprevalencia de SRLVs así como el estudio de prevalencia más reciente en esta región de España. Además cada muestra fue analizada usando una técnica de PCR (PCR-pol, que amplifica un fragmento en el gen pol, que está altamente conservado en retrovirus), que aumentó el porcentaje de animales detectados por ELISA. Un total de 72,2% de las ovejas y un 28,8% de las cabras fue positivo a SRLVs por ELISA y/o PCR. Se concluyó que tanto ELISA como PCR se pueden usar para el diagnóstico de SRLV en leche.

Asimismo, se utilizó también una segunda técnica de PCR (PCR-LTR, que amplifica un fragmento en el ADN proviral LTR) para el diagnóstico de SRLVs. La detección del genoma proviral, a pesar de ser sensible, es difícil debido a la heterogeneidad de los genomas de los SRLVs. Leche de 194 ovejas y 163 cabras procedentes de granjas de la región central de España fueron analizadas usando ambas técnicas de PCR y sus resultados comparados con los resultados obtenidos por ELISA. Cuando se comparó con el ensayo serológico, la concordancia de ambas pruebas de PCR fue muy baja (0,024 y 0,020 en ovejas, y 0,124 y 0,114 en cabras para PCR-pol y PCR-LTR, respectivamente). A la vista de estos resultados, se podría concluir que la eficacia de la PCR para el diagnóstico de SRLVs es baja y una combinación de PCR y ELISA debiera ser usada para el diagnóstico.

Se llevó a cabo un estudio epidemiológico para identificar factores de riesgo asociados a la infección por SRLVs en la región central de España. Las mismas 194 ovejas y 163 cabras del párrafo anterior fueron analizadas para la detección de SRLVs usando las técnicas de ELISA yPCR-pol. El objetivo de este estudio era explorar la relación entre las diferencias en la prevalencia de SRLVs y la localización geográfica de la explotación, las manifestaciones mamarias de la enfermedad y posibles factores relacionados con el rebaño que puedan favorecer la transmisión. Los resultados del análisis multivariable mostraron una asociación entre la infección por SRLVs, la localización geográfica del rebaño y el sistema de explotación.

Además se exploraron las diferencias en la productividad entre animales infectados y no infectados. Los parámetros productivos fueron medidos en 62 ovejas y 28 cabras. Todos los parámetros productivos estudiados (como la producción láctea, el número de días en lactación y el número de crías nacidas) parecían estar reducidos en el grupo SRLV-positivo, tanto en ovejas como en cabras. A pesar de que estas diferencias no eran significativas, parece que los animales infectados eran menos productivos que los no infectados. El análisis estadístico comparando animales infectados con no infectados no mostró ninguna relación estadística con respecto a la calidad de la leche.

El último objetivo de esta tesis fue evaluar la presencia en el tiempo de anticuerpos específicos por ELISA y de ADN proviral de SRLV mediante la técnica PCR-pol. Se llevó a cabo un estudio de seis meses en muestras de leche de 28 ovejas y 31 cabras criadas de forma intensiva. El porcentaje de animales con anticuerpos anti-SRLV se incrementó durante el periodo de estudio. La seroprevalencia en ovejas era de un 28% al inicio del estudio (diciembre) y al final del mismo (junio) se había incrementado hasta un 52,4%. El porcentaje de ovejas PCR positivas se incrementó desde diciembre (8,0%) hasta abril (37,5%), pero descendió de forma marcada en junio (9,5%). En cabras, la seroprevalencia inicial de 5,6% (en marzo) se incrementó hasta 16% (en septiembre), pero el porcentaje de cabras PCR-positivas permaneció estable durante el periodo de estudio y osciló entre 35,3% y 55,6%, dependiendo del mes.

De las ovejas positivas, 21,43% fueron PCR-positivas antes de que los anticuerpos pudieran ser detectados, y en muchas de estas ovejas los resultados de PCR pasaron a ser negativos cuando se detectaron los anticuerpos. Varios animales fueron siempre ELISA-positivo o seroconvirtieron durante el estudio pero nunca fueron PCR positivo (14,3% y 7,1%, respectivamente). Todo esto sugiere un control eficiente de la infección mamaria por SRLVs mediante la respuesta del sistema inmune humoral. En cualquier caso, en el 14,28% de las ovejas, los anticuerpos fueron detectados antes de la detección del ADN proviral, implicando una respuesta menos efectiva en estos animales. Por otro lado, la presencia de anticuerpos en la leche de las cabras no pareció ser eficiente en controlar la presencia de SRLVs en leche, a pesar de que el 12,9% de las cabras llegó a ser PCR-negativo durante el periodo de estudio.

Documento completo:

http://eprints.ucm.es/20088/1/T34342.pdf